Новгородский посадник Остромир, по заказу которого создан список, в надписи книги назван "близоком" (родственником) князя Изяслава Ярославича. По одной из гипотез, упомянутая в надписи жена Остромира Феофана могла быть дочерью Владимира Святославича и Анны Византийской. Запись на первом листе, крупным скорописным почерком XVI века - "Евангелие софейское апракос" - говорит о том, что книга, по-видимому, была вкладом Остромира в Новгородский Софийский собор.

Рукопись написана крупным красивым уставом, причем высота букв постепенно возрастает к концу (от 5 до 7 мм). Текст расположен в два столбца по 18 строк на площади около 20х24 см. Имеются многочисленные красочные буквицы, а также заставки и изображения евангелистов; в тексте употребляется киноварь. Книга состоит из 294 листов (с оборотами) пергамена хорошего, но не высшего качества: есть листы с зашитыми разрезами и с дырками, которые были еще до написания текста.

Документальные сведения о памятнике известны только с 1805 г., когда бывший личный секретарь Екатерины II Я.А.Дружинин, после смерти Императрицы выполнявший осмотр оставшихся во дворце вещей, обнаружил старинную пергаментную книгу, нигде в описях не значащуюся, вероятно, некогда подаренную Екатерине и хранившуюся в ее комнатах. Он поднес свою находку в 1806 г. Императору Александру I, который повелел передать ее в Императорскую Публичную Библиотеку. В числе первых исследователей были А.Н.Оленин, Н.П.Румянцев, митрополит Евгений (Болховитинов), Н.М.Карамзин, А.И.Ермолаев, П.И.Кеппен. Много лет посвятил изучению рукописи А.Х.Востоков, издавший ее с обширным научным аппаратом в 1843 г. Многие крупные ученые (Ф.И.Буслаев, И.И.Срезневский, Ф.Ф.Фортунатов, В.Н.Щепкин и др.) обращались к Остромирову Евангелию как к памятнику, имеющему огромное значение для истории русского и славянского языкознания, книжного дела, искусства и культуры Руси середины XI века.